Boletín N˚ 97 – Agosto 2010

Desarrollo y validación de ensayos diagnósticos con alta sensibilidad y especificidad para el estudio epidemiológico de la brucelosis en cetáceos que habitan los litorales marinos de Costa Rica

Participantes:

Dr. Edgardo Moreno (Responsable del proyecto): Programa de Investigación en Enfermedades Tropicales (PIET), Escuela de Medicina Veterinaria, Campus Benjamín Núñez, Universidad Nacional, Heredia, COSTA RICA

Dra. Caterina Guzmán: Programa de Investigación en Enfermedades Tropicales (PIET), Escuela de Medicina Veterinaria, Campus Benjamín Núñez, Universidad Nacional, Heredia, COSTA RICA.

Dr. Edgardo Moreno

Dr. Esteban Chaves-Olarte: Programa de Investigación en Enfermedades Tropicales (PIET), Escuela de Medicina Veterinaria, Campus Benjamín Núñez, Universidad Nacional, Heredia, y Centro de Investigación en Enfermedades Tropicales (CIET), Facultad de Microbiología, Universidad de Costa Rica, COSTA RICA

MSc. Elías Barquero-Calvo: Programa de Investigación en Enfermedades Tropicales (PIET), Escuela de Medicina Veterinaria, Campus Benjamín Núñez, Universidad Nacional, Heredia, COSTA RICA

MDV. Gabriela Hernández-Mora: Programa de Investigación en Enfermedades Tropicales (PIET), Escuela de Medicina Veterinaria, Campus Benjamín Núñez, Universidad Nacional, Heredia, COSTA RICA

MDV. Rocío González-Barrientos: cátedra de Patología, Escuela de Medicina Veterinaria, Campus Benjamín Núñez, Universidad Nacional, Heredia, COSTA RICA

Resumen del proyecto:

Los cetáceos, como delfines, marsopas y ballenas, tienen gran valor ecológico y comercial, ya que son parte fundamental de la cadena alimenticia de los océanos y una fuente importante de proteína y grasas en muchas latitudes. También constituyen una atracción turística significativa. Asimismo los delfines son

utilizados en terapias, como la estimulación de niños con autismo, síndrome de Down o paraplejía. Por otro lado, la presencia de cetáceos en los mares y litorales constituye un indicador fundamental sobre el bienestar y salud de los océanos limítrofes, por lo que su presencia nos revela la magnitud en que estamos protegiendo nuestros recursos marítimos. En Costa Rica los cetáceos se han convertido en una atracción turística de primer orden, lo que representa altos ingresos para las comunidades que viven cerca del océano. Sin embargo, en los litorales de Costa Rica al igual que en otras costas del mundo ocurren encallamientos que consisten en un comportamiento errático de estos animales, en el cual un delfín, ballena o marsopa, llega vivo a la playa o bien se mantiene a flote cerca de la costa o en aguas poco profundas y es incapaz de regresar mar adentro por sus propios medios. Este fenómeno representa un problema, pero a su vez constituye una oportunidad para investigar las enfermedades que generan este tipo de conductas en las poblaciones silvestres marinas.

Costa Rica posee con una extensión marítima diez veces mayor a su extensión terrestre. En estas aguas habita el treinta y cinco por ciento de la biodiversidad mundial de cetáceos, representada por aproximadamente 29 especies. Uno de los objetivos de esta investigación fue la evaluación anátomo-histopatológica e inmunohistoquímica para la detección de Brucella sp. y Morbillivirus, 19 cetáceos encallados fueron analizados en el Servicio de Patología de la Escuela de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional en los años 2001-2009. Durante este periodo se observó un aumento gradual en el número de casos de aproximadamente un caso por año, observándose en el año 2006 el mayor número de animales referidos (6/20). El mes de julio fue el mes que presento mayor número de animales encallados (7/20). Todos los cetáceos analizados correspondieron a animales varados en la costa Pacífica, es su mayoría en la provincia de Puntarenas (17/21). Catorce de los delfines correspondieron a hembras y 6 a machos. Diecisiete de los cetáceos evaluados correspondieron a delfines de la especie Stenella coeruleoalba (delfín listado), mientras que los restantes comprendieron casos individuales de las especies Stenella longirostris (delfín girador), Stenella attenuata (delfín manchado) y Kogia sima (cachalote enano). En la mayoría de los casos las lesiones más severas fueron observadas a nivel de SNC, donde macroscópicamente la hiperemia (13/20) y el aumento en la cantidad de líquido cefalorraquídeo (5/20) fueron los principales hallazgos observados. El análisis histológico del sistema nervioso se realizó en 18 de los cetáceos. En catorce de estos animales se presentó una meningoencefalomielitis mononuclear especialmente severa en las zonas basales del encéfalo. Doce de estos animales contaban con altos títulos de anticuerpos frente a Brucella sp., y en ocho de los mismos se logró el aislamiento de Brucella ceti a partir del líquido cefalorraquídeo. Sin embargo no se encontraron resultados inmunohistoquímicos positivos para la detección de Brucella sp. en ninguno de los cortes histológicos evaluados para el SNC. De manera similar resultaron negativas las pruebas para la inmunodetección Morbillivirus en el tejido encefálico y pulmonar. Simultáneamente se observó una severa endocarditis nodular en la válvula mitral y una severa placentitis necrotizante en dos de los delfines listados positivas al aislamiento de Brucella ceti y positivos a la IH para Brucella sp. . En base a estos resultados se consideró a la Brucela ceti como el principal agente bacteriano causante de las lesiones observadas en el sistema nervioso de la mayoría de los casos analizados.

         El segundo objetivo fue el de desarrollar pruebas diagnpositicas de alta sensibilidad y especificidad para la brucelosis en odontocetos. En el momento de la investigación no exisitíán pruebas específicamente diseñadas para la detección de anticuerpos contra Brucella en estos animales.  Durante nuestras investigaciones  desarrollamos y estandarizamos dos pruebas de ELISA indirecta y una de ELISA de competencia con alta sensibilidad y especificidad química y serológica para la detección de anticuerpos contra Brucella en odontocetos.   Las pruebsa son sencillas y tienen valor predictivo, siendo la mejor de ellas la que de ELISA indirecta que usa un conjugado anti-odontoceto. La prueba se basa en la utilización del lipopolisacárido purificado de Brucella y de un conjugado que reconoce a los anticuerpos de por lo menos dieciséis especies diferentes de odontocetos.  La prueba demostró linearidad en las reacciones, en relación con las diluciones de los sueros positivos y un bajo ruido de fondo. De acuerdo con el análisis estadístico se usaron 178 sueros escogidos, se estableció un valor kappa de 0.9, una sensibilidad máxima de 93.75% y una especificidad de 97.06%, cuando el ELISA indirecto se compara con pruebas combinadas de inmunofluorescencia y Rosa de Bengala, ELISA de competencia y ELISA proteína G.  De un total de 113 animales de dieciséis especies diferentes de odontocetos, 36 (33.33%) de ellos resultaron positivos, independientemente de su edad, sexo, o estado reproductivo.  Trece de los odontocetos provenían del Pacífico de Costa Rica, de los cuales siete resultaron positivos con tres aislamientos de Brucella.  De 17 casos con meningoencefalitis, doce poseían anticuerpos contra Brucella.  Se discute las implicaciones de la infección por “Brucella ceti” en delfines haciendo énfasis en los problemas zoonóticos que podría acarrear esta bacteria.