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Extracción
ácidos nucléicos totales
Se extrajeron de micelio liofililizado
de R. solani, cultivado en AC agar
(Sigma) con 120μl/L (50mg/ml) de ampicilina; según el protocolo de
Pascual et al (2000);
con ciertas modificaciones.
Amplificación
por PCR.
La
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) se realizó de acuerdo a las
condiciones descritas por Godoy et al. (2008).
Análisis estadístico
de los datos
Se llevó a cabo un Análisis de Varianza (ANDEVA) en los
datos obtenidos al evaluador el grado de patogenicidad in vitro de cada introducción en dos variedades de frijol
(1=Bribrì 2=Brunca) donde se utilizó la escala de CIAT (1991). Se compararon
los aislamientos, considerando el tiempo de seguimiento como covariable, el
aislamiento y variedad como factores. Se incluyó la interacción entre
tiempo y aislamiento. Se realizó una comparación múltiple de Tukey para
corroborar los resultados. Los datos fueron agrupados en tres
categorías el primer grupo, con baja patogenicidad de 0-3, el segundo de
3.00000001 -6.999999999 patogenicidad intermedia y el tercero de 7.0-9 con
alta patogenicidad. Se hicieron las
comparaciones por separado para cada tiempo (24, 48 y horas). En la
realización del análisis se formuló un programa en el lenguaje R versión
2.10.0
Resultados y conclusiones
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En la actualidad se dispone de una micoteca compuesta por 90
aislamientos, todos los aislamientos fueron caracterizados según e color
forma y tamaño del micelio.
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Las muestras se encuentran almacenadas por duplicado en diferentes
métodos de conservación, entre ellos: tubos inclinados en PDA, tubos con
aceite mineral estéril, semillas de remolacha y liofilizados.
·
Los aislamientos que presentaron el mayor
grado de patogenicidad según la escala de CIAT se encuentran incluidos en la
categoría tres, donde se observó que el aislamiento más virulento a las 24
horas fue el 3636, proveniente de la región climática montañosa del sur. Este
aislamiento se caracteriza por tener macroesclerocios, y pertenecer al
subgrupo de anastomosis AG-1-IE, seguido por
el 3843, éste se aisló de plantaciones ubicadas en las Juntas de San Ramón,
de la Región climática Central Occidental. Se obtuvo
un tercer, cuarto, quinto y sexto grupo, constituidos por aislamientos
procedentes de diversas regiones edáficas, climáticas y geográficas, las
características morfológicas de éstos son variables.
·
La categoría comprendida con
patogenicidad intermedia reúne la mayor cantidad de aislamientos,
muestran un grado de patogenicidad intermedia. Son procedentes de diferentes regiones
geográficas y se caracterizan por pertenecer a diferentes grupos de
anastomosis.
·
Cuando se analizaron
las áreas obtenidas a través del área afectada por R. solani mediante el programa Scion image, se obtuvo que el
aislamiento 3843 fue el más patogénico, pertenece
al grupo de anastomosis AG1 y al subgrupo IE, y fue aislado de material
vegetal procedente de la región climática Central Occidental.
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Los datos fueron agrupados en tres
categorías el primer grupo, con baja patogenicidad de 0-4.9999999, el segundo
de 5-12.49 patogenicidad intermedia y el tercero de 12.5-20 con alta
patogenicidad. Se hicieron las
comparaciones por separado para cada tiempo (24, 48 y 72 horas).
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Se determinó que los
aislamientos con mayor grado de patogenicidad fueron 3636, 3233, 3843, 3801,
3242, 3979,3841, 3804. Este grupo corresponde a los que tienen un valor
mediano del área superior a 12.5 cm2, ellos presentaron la mayor
área de tejido foliar enferma en el menor tiempo en todas las evaluaciones,
se pueden considerar como un solo bloque al no presentar diferencias
estadísticas significativas entre ellos ni entre las dos variedades evaluadas
(p>0.05). Éstos pertenecen al grupo AG-1, y a los subgrupos
IE e IF, ambos presentan diferentes características morfológicas en lo que respecta
a producción de macro y micro esclerocios.
·
Es de gran relevancia resaltar que al
relacionar el grado de patogenicidad y el grupo de anastomosis a que
pertenecen con su lugar de origen, no existe relación alguna, de forma tal
que existen diferentes grupos y subgrupos de anastomosis en todas las
regiones geográficas que fueron muestreadas, sin importar las diferencias
edáficas y climáticas que imperan en cada una de ellas. Lo anterior evidencia
el alto grado de adaptabilidad y supervivencia de este patógeno, así como su
importancia desde el punto de vista agronómico.
·
Al considerar los resultados obtenidos en
este estudio, se puede señalar que la mustia hilachosa o telaraña del frijol
(Phaseolus vulgaris), es causada
por diversos subgrupos de Rhizoctonia
solani. AG1 IB, AG1 IC, AG1 ID, AG1 IE, AG1 IF además de AG2-2- 2WB y
AG4, la composición genética variable del patógeno puede ser afectada por la
dinámica de la relación hospedero-patógeno, debido a la flexibilidad genética
presente en éste, muestra algún grado de adaptación al nicho ecológico donde
se desarrolla en los diversos agroecosistemas.
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